RESUMO E EXPLICACIÓN DA PROBA
A malaria é unha enfermidade febril, hemolítica e transmitida por mosquitos que infecta a máis de 200 millóns de persoas e mata a máis de 1 millón de persoas ao ano.Está causada por catro especies de Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.Todos estes plasmodios infectan e destrúen os eritrocitos humanos, producindo escalofríos, febre, anemia e esplenomegalia.P. falciparum causa enfermidades máis graves que as outras especies plasmodiais e é responsable da maioría das mortes por malaria.P. falciparum e P. vivax son os patóxenos máis comúns, porén, hai unha considerable variación xeográfica na distribución das especies.
Tradicionalmente, a malaria é diagnosticada mediante a demostración dos organismos en frotis espesos de sangue periférico tinguidos de Giemsa, e as diferentes especies de plasmodio distínguense pola súa aparición en eritrocitos infectados1.A técnica é capaz de realizar un diagnóstico preciso e fiable, pero só cando a realizan microscopistas expertos utilizando protocolos definidos2, o que presenta grandes obstáculos para as zonas remotas e pobres do mundo.
O kit de proba rápida Malaria Pf / Pan Antigen está desenvolvido para resolver estes obstáculos.A proba utiliza un par de anticorpos monoclonais e policlonais contra a proteína específica de P. falciparum, a Histidine Repeat Protein II (pHRP-II) e un par de anticorpos monoclonais contra a plasmodio lactato deshidroxenase (pLDH), unha proteína producida polas catro especies do plasmodio, polo que permite a detección e diferenciación simultánea de calquera dos outros tres plasmodum.Pode ser realizado por persoal sen formación ou mínimamente cualificado, sen equipamento de laboratorio.
PRINCIPIO
O kit de proba rápida Pf/ Pan Malaria é un inmunoensaio cromatográfico de fluxo lateral.Os compoñentes da tira de proba consisten en: 1) unha almofada conxugada de cor borgoña que contén anticorpo anti-pLDH-II de rato conxugado con ouro coloide (conxugados de ouro pHRP II) e anticorpo anti-pLDH de rato conxugado con ouro coloide (conxugados de pLDH-ouro),
2) unha tira de membrana de nitrocelulosa que contén dúas bandas de proba (bandas Pan e Pv) e unha banda de control (banda C).A banda Pan está recuberta previamente con anticorpos monoclonais anti-pLDH polo que se pode detectar a infección con calquera das catro especies de plasmodios, a banda Pf está recuberta previamente con anticorpos policlonais anti-pHRP-II para detectar a infección por Pf e a banda C está recuberta con IgG anti-rato de cabra.
Durante o ensaio, un volume adecuado da mostra de sangue é dispensado no pozo da mostra (S) do casete de proba, engádese un tampón de lise ao pozo do tampón (B).O tampón contén un deterxente que lisa os glóbulos vermellos e libera varios antíxenos de plasmodio, que migran por acción capilar a través da tira mantida no casete.O pHRP-II se está presente na mostra unirase aos conxugados pHRP II-ouro.Despois, o inmunocomplexo é capturado na membrana polos anticorpos anti-pHRPII pre-revestidos, formando unha banda de Pf de cor borgoña, o que indica un resultado positivo da proba de Pf.Se o pLDH está presente no espécime unirase aos conxugados de ouro pLDH.A continuación, o inmunocomplexo é capturado na membrana polo anticorpo antipLDH pre-revestido, formando unha banda Pan de cor borgoña, o que indica un resultado positivo na proba de plasmodio.En ausencia da banda Pan, pódese recomendar un resultado positivo da proba para calquera dos outros tres plasmodios.
A ausencia de bandas de proba (Pan e Pf) suxire un resultado negativo.A proba contén un control interno (banda C) que debería mostrar unha banda de cor borgoña do inmunocomplexo de IgG anti-rato de cabra/IgG de rato (conxugados pHRP-II e pLDH-ouro) independentemente do desenvolvemento da cor en calquera das bandas de proba.En caso contrario, o resultado da proba non é válido e a mostra debe ser probada de novo con outro dispositivo.
